Quantificação dos níveis de mediadores imunológicos no fluido de revestimento da mucosa humana

Descongele os papéis de filtro contendo o fluido de revestimento da mucosa nasal absorvido no gelo para evitar a degradação da amostra.

O fluido compreende mediadores imunológicos, incluindo quimiocinas e citocinas.

Mergulhe os papéis de filtro em um tampão. Transfira o conteúdo para filtros de tubo. Centrifugue para eluir o fluido de revestimento da mucosa do papel de filtro.

Adicione o extrato nasal filtrado à placa de ensaio padronizada com uma série de anticorpos de captura específicos do mediador.

Os mediadores imunológicos se ligam aos seus anticorpos correspondentes.

Introduzir anticorpos de detecção marcados com um complexo de rutênio, que se ligam aos seus respectivos mediadores.

Adicione tampão à base de tris contendo tripropilamina ou TPA.

Quando um potencial é aplicado através dos eletrodos, o complexo de rutênio e o TPA sofrem oxidação.

O radical TPA resultante excita o complexo de rutênio.

Ao retornar ao seu estado fundamental, o complexo de rutênio emite fótons.

A intensidade da luz medida é proporcional à concentração específica do mediador imunológico no fluido de revestimento da mucosa.

Para quantificação do mediador imunológico das vias aéreas, coloque até 10 amo