Avaliação da ativação de múltiplas caspases em macrófagos

Comece com uma placa de vários poços contendo macrófagos derivados da medula óssea aderidos.

Introduza vírus influenza A que se fundem com macrófagos, liberando ribonucleoproteínas contendo RNA viral.

A proteína 1 de ligação ao Z-DNA dos macrófagos, ou ZBP1, interage com as ribonucleoproteínas virais, desencadeando a oligomerização de ZBP1, com quinases e caspase 8.

O ZBP1 oligomerizado recruta ainda proteínas sensoras de inflamassoma, proteínas adaptadoras e procaspase-1, formando um complexo multimérico - um PANoptossomo.

Dentro do PANoptossomo, a caspase-8 iniciadora é ativada por clivagem de proximidade, ativando ainda mais as caspases efetoras, incluindo a caspase-3 e 7.

Além disso, as proteínas sensoras do inflamassoma dentro do PANoptossomo ativam uma cascata de sinalização, convertendo a pró-caspase-1 em sua forma ativa, a caspase-1.

Ao mesmo tempo, a infecção viral induz a liberação de citocromo-c da mitocôndria, desencadeando a ativação do apoptossomo e convertendo a pró-caspase-9 em sua forma ativa.

A infecção viral também desencadeia a via não canônica do inflamassoma, ativando a caspase-11.

Introduzir um tampão de lise para lisar os macrófagos; coletar o lisado e aquec