Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:33 min. • July 8th, 2025
Para um ensaio de microneutralização, pegue uma placa de vários poços contendo soro humano inativado por calor, diluído em série, com concentrações decrescentes de anticorpos neutralizantes específicos para influenza.
Introduzir vírus influenza patogênicos. Os anticorpos séricos interagem com os vírus e os neutralizam; no entanto, diluições séricas mais altas exibem neutralização viral limitada.
Semente com células do rim canino de Madine-Darby, ou células MDCK, superexpressando resíduos de ácido siálico humano em sua superfície.
Na diluição mais alta, os vírus influenza não neutralizados se fundem com o ácido siálico das células, liberando o genoma viral no citoplasma celular.
Os genes virais são transcritos e traduzidos em proteínas virais e nucleoproteínas dentro da célula hospedeira.
Trate com alta concentração de acetona para fixação e permeabilização.
Introduzir anticorpos primários que interagem com nucleoproteínas virais.
Sobreposição com anticorpos secundários conjugados com enzimas que interagem com anticorpos primários. Lave e trate com o substrato da enzima, produzindo um produto colorido.
Quantifique as intensidades de cor e plote-as em relação à diluição do soro; a ma
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