Um ensaio para detectar explosão oxidativa em discos de folhas de Arabidopsis após elicitação imune

Obtenha discos de folhas de Arabidopsis thaliana. Mergulhe-os em poços de microplacas contendo água bidestilada para evitar a dessecação.

Incube os discos para permitir a recuperação de ferimentos.

Pós-incubação, remova a água. Adicione uma mistura de reação contendo peptídeos derivados de bactérias, enzima peroxidase de rábano e luminol.

Usando um leitor de microplacas, meça a luminescência ao longo do tempo.

Os receptores de reconhecimento de padrões, ou PRRs, nas células vegetais, ligam-se aos peptídeos bacterianos, que são padrões moleculares associados a micróbios.

Além disso, o PRR se associa ao seu co-receptor, sofrendo fosforilação mútua, ativando proteínas quinases semelhantes a receptores e causando influxo intracelular de cálcio.

Isso, por sua vez, ativa o homólogo da explosão respiratória oxidase transmembrana, ou proteínas RBOH.

O RBOH ativado catalisa a produção de espécies reativas extracelulares de oxigênio, ou ROS, causando uma explosão oxidativa. Além disso, as ROS são convertidas em peróxido de hidrogênio.

A peroxidase de rábano utiliza peróxido de hidrogênio para oxidar o luminol em um estado excitado, emitindo luminescência ao retornar ao estado fundamental.

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