Um ensaio para detectar a produção de espécies reativas de oxigênio em tecidos de arroz após elicitação imunológica

Pegue uma microplaca contendo segmentos de bainha uniformes cortados de mudas de arroz e discos de folhas obtidos de folhas de plantas de arroz.

Adicione água estéril e incube durante a noite para permitir a recuperação do estresse da ferida.

Adicione um peptídeo imunogênico derivado de flagelos bacterianos que atua como um padrão molecular associado a patógenos ou PAMP.

As células vegetais nas bordas cortadas se ligam aos PAMPs por meio de receptores de reconhecimento de padrões.

A ligação desencadeia a sinalização a jusante, ativando uma enzima localizada na membrana plasmática denominada homóloga da oxidase respiratória ou RBOH.

O RBOH ativado produz espécies reativas de oxigênio ou ROS no apoplasto - o espaço intercelular. As ROS produzidas são convertidas em peróxido de hidrogênio.

Adicione uma enzima peroxidase e um substrato quimioluminescente.

A peroxidase utiliza peróxido de hidrogênio para converter o substrato em um intermediário de estado excitado, que libera energia como luz e retorna ao estado fundamental.

Meça a luminescência em ambos os tipos de tecido para detectar um aumento acentuado imediatamente após o tratamento com PAMP, indicando uma explosão de ROS.

Corte a