Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:14 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa multipoços contendo um modelo estabelecido de infecção por Mycobacterium tuberculosis ou Mtb.
Os poços contêm agregados celulares que compreendem um núcleo de macrófagos necróticos infectados com Mtb e Mtb densamente compactados, cercados por macrófagos não infectados - imitando a infecção in vivo.
Tome uma diluição em série dos antibióticos rifampicina e moxifloxacina.
Descarte o meio da placa de infecção, transfira as diluições de antibióticos para os poços e incuba.
Os antibióticos se difundem através dos agregados celulares e entram nas células bacterianas.
A rifampicina se liga à RNA polimerase bacteriana, inibindo a síntese de RNA e causando a morte bacteriana.
A moxifloxacina se liga à topoisomerase do DNA bacteriano, inibindo a replicação e interrompendo o crescimento bacteriano. A ligação também induz respostas ao estresse, incluindo o acúmulo de espécies reativas de oxigênio, matando as bactérias.
Após a incubação, adicione resazurina - um indicador redox. Dentro de bactérias vivas e metabolicamente ativas, a enzima oxidorredutase reduz a resazurina azul a resorufina fluorescente rosa.
Meça a fluorescência para detectar bactérias viáveis.
A sobrevivência b
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