Um ensaio in vitro para examinar o aumento dependente de anticorpos da infecção viral
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:35 min. • July 8th, 2025
Pegue uma microplaca com diluições seriadas de uma amostra de soro contendo anticorpos contra o vírus Zika.
Adicione partículas do vírus repórter da dengue ou RVPs e incuba.
Os RVPs projetados compreendem um envelope com proteínas estruturais e um nucleocapsídeo contendo RNA genômico, codificando uma proteína fluorescente.
A homologia estrutural das proteínas do envelope dos vírus da dengue e do zika faz com que os anticorpos reajam de forma cruzada com os RVPs, formando um complexo.
Adicione células de leucemia humana inadmissíveis à infecção por RVPs.
As células possuem receptores Fc que reconhecem os anticorpos ligados ao RVP, facilitando a entrada dos RVPs dentro dos endossomos - denominado aprimoramento dependente de anticorpos ou ADE.
Pulverizar as células e rejeitar o sobrenadante que contém RVPs não internalizados. Adicionar um meio de crescimento e incubar.
A fusão dependente de pH do RVP e das membranas endossômicas libera o nucleocapsídeo, que se desmonta para liberar RNA genômico, permitindo a expressão de proteínas fluorescentes.
Fixe as células e analise-as usando citometria de fluxo.
Uma fluorescência mais alta em uma concentração adequada de anticorpos representa ma
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