Um ensaio para rastrear nanopartículas bioativas para inibição de sinalização de receptores do tipo Toll
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:53 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa multipoços com diferentes macrófagos repórteres que abrigam o gene da fosfatase alcalina embrionária secretada, ou SEAP, ou um gene da luciferase secretado sob promotores induzíveis.
Adicione meios contendo diferentes híbridos de nanopartículas peptídeo-ouro misturados com lipopolissacarídeos ou LPS aos poços designados.
O LPS se liga a receptores do tipo toll de macrófagos, ou TLR, desencadeando a internalização no endossomo.
A bomba de prótons endossômica transporta prótons para dentro. A acidificação desencadeia a sinalização TLR, ativando fatores de transcrição.
Esses fatores induzem a expressão dos genes repórteres, produzindo SEAP ou luciferase.
Alternativamente, a internalização do LPS junto com os híbridos faz com que os grupos peptídicos carregados negativamente sequestrem prótons luminais, evitando a acidificação endossômica e inibindo a sinalização TLR.
Colete o meio, centrifugue para separar o sobrenadante e adicione substratos para SEAP e luciferase.
O SEAP converte seu substrato em um produto colorido, enquanto a luciferase catalisa seu substrato para produzir luminescência.
Uma redução nos sinais repórter indica a eficácia dos híbridos na inibição da
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