Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 6:23 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa multipoços contendo uma monocamada de células de mamíferos.
Inocular os poços com diluições seriadas de homogeneizados de tecidos contendo o vírus Zika, derivados de diferentes órgãos de um camundongo infectado.
Ao entrar nas células por endocitose, o vírus se multiplica e brota para infectar as células vizinhas.
Cubra com uma solução de metilcelulose de alta viscosidade, criando uma barreira física que restringe o movimento do vírus.
A barreira permite apenas a infecção de células vizinhas imediatas, formando focos de células infectadas, e garante que cada foco se origine de uma única partícula de vírus, permitindo uma quantificação precisa.
Fixe as células e permeabilize a membrana. Adicione anticorpos primários que entram nas células e interagem com o antígeno viral.
Introduza um anticorpo secundário conjugado com peroxidase que se liga ao anticorpo primário.
Adicione um substrato cromogênico que é convertido pela peroxidase para criar manchas coloridas, indicando os focos de células infectadas.
Conte os focos para quantificar o título do vírus nos diferentes órgãos do camundongo.
Retirar as amostras homogeneizadas do congelador de 80 graus Celsius negativos e de
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