Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:29 min. • July 8th, 2025
Pegue duas microplacas contendo lamínulas com macrófagos derivados da medula óssea ou BMMs.
Adicione promastigotas metacíclicos de Leishmania - o estágio flagelado alongado - em uma placa e amastigotas - o estágio oval não flagelado - em outra placa.
Durante a incubação, os parasitas se ligam aos receptores de macrófagos, desencadeando a fagocitose mediada por receptores.
O fagossomo se funde com os lisossomos e vesículas derivadas do retículo endoplasmático e do aparelho de Golgi, amadurecendo em um vacúolo parasitóforo.
A diminuição do pH do vacúolo desencadeia a diferenciação promastigota em amastigota e sua replicação.
Lave para remover parasitas não internalizados.
Fixe os macrófagos infectados e adicione detergente para permeabilizar as células e parasitas.
Introduza um corante de ácido nucleico fluorescente para corar os núcleos de macrófagos e parasitas.
Monte as lamínulas nas lâminas e observe ao microscópio de fluorescência, quantificando os núcleos hospedeiros maiores e os núcleos amastigotas menores circundantes.
Compare o número de amastigotas para avaliar sua multiplicação dentro de macrófagos inicialmente infectados com promastigotas indiferenciados versus aqueles in
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