Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:20 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços contendo diluições em série do composto de teste, um antibiótico aminoglicosídeo.
Adicione uma suspensão de Mycobacterium tuberculosis - uma bactéria patogênica - nos poços e incuba.
No citoplasma, o composto de teste se liga à subunidade ribossômica micobacteriana 30S, inibindo a síntese normal de proteínas e, eventualmente, levando à morte micobacteriana.
Após a incubação, adicione resazurina - um corante solúvel em água fracamente fluorescente, às culturas. Incubar.
Dentro de micobactérias metabolicamente ativas viáveis, as enzimas desidrogenase reduzem a resazurina de cor azul a uma resorufina fluorescente de cor rosa.
Usando um leitor de placa de fluorescência, meça a intensidade de fluorescência da resorufina nos poços.
Um baixo valor de intensidade de fluorescência com concentrações crescentes do composto de teste sugere seus efeitos citotóxicos contra as micobactérias.
Para realizar um ensaio de resazurina, cultive M. tuberculosis na fase 7H9ADST até o meio do log. Diluir a cultura com 7H9ADST até obter uma DO600 de 0,01. Use 7H9ADST para diluir os compostos para duas vezes as concentrações de teste e alíquota de 100 microlitros de cada compo
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