Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:00 min. • July 8th, 2025
Comece com uma lâmina contendo seções de biópsia da artéria temporal fixadas em formalina, desparafinizadas e reidratadas com células imunes infiltradas, incluindo linfócitos e macrófagos.
Os macrófagos ativados expressam o receptor de folato beta ou FR-β - um marcador relacionado à doença, diferenciando os macrófagos de outras células imunológicas.
Transfira a lâmina para um tampão pré-aquecido para recuperar os receptores de superfície.
Trate a seção com peróxido de hidrogênio, bloqueando a atividade da peroxidase intracelular.
Introduza uma mistura de anticorpos primários direcionados a CD3, CD68 e FR-β, que se ligam às células imunes que expressam essas proteínas.
Adicione anticorpos secundários biotinilados, interagindo com anticorpos primários, e lave.
Sobreposição com enzimas conjugadas com estreptavidina que se ligam à biotina.
Trate com um substrato cromogênico que interage com enzimas, produzindo precipitados marrons localizados.
Introduza uma contracoloração - hematoxilina, corando os núcleos de azul.
Identifique microscopicamente células pequenas, redondas e coradas de marrom como linfócitos que expressam CD3 e células grandes, irregulares e coradas de marrom como macró
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