Um ensaio para análise do ciclo celular de células T CD8⁺ específicas do antígeno

Pegue células de órgãos linfóides secundários de um camundongo imunizado com antígeno, contendo células T CD8 ⁺ específicas do antígeno em diferentes estágios do ciclo celular.

G₁, S, G₂ e M são estágios de células em divisão ativa, enquanto as células no estágio G₀ são quiescentes.

Adicione um corante de viabilidade fluorescente para marcar células mortas e anticorpos marcados com fluoróforo ligando-se aos marcadores de superfície de células T CD3 e CD8.

Introduzir multímeros de peptídeo antigênico-MHC conjugados com fluoróforo para se ligar aos receptores de células T, marcando as células T específicas do antígeno.

Usando um tampão, fixe e permeabilize as células.

Introduza anticorpos marcados com fluoróforo para se ligar a uma proteína nuclear associada à proliferação celular - corando as células que se dividem ativamente.

Adicione uma coloração fluorescente para rotular o DNA.

Usando citometria de fluxo, selecione as células vivas e identifique as células T CD8 ⁺ específicas do antígeno por meio dos marcadores ligados à superfície.

A intensidade da coloração de DNA discrimina as células G₀ e G₁ com menor quantidade de DNA das células S, G₂ e M com maior quantidade de DNA. A aus