Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:34 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo uma suspensão de célula única de células mieloides da retina de camundongos, incluindo microglia, monócitos e neutrófilos.
Microglia - ou células imunes fagocíticas da retina, exibem fluorescência devido a biopartículas marcadas com fluoróforo de origem fúngica engolfadas, pré-injetadas intravítreas.
Centrifugue e adicione anticorpos receptores Fc, bloqueando locais de interação não específicos.
Introduza um coquetel de anticorpos marcados com fluoróforo direcionados às proteínas de superfície CD11b, Ly6C e Ly6G, interagindo com as células mieloides que as expressam.
Remova os anticorpos não ligados. Trate com iodeto de propídio, que permeia através de membranas danificadas, colorindo exclusivamente as células mortas.
Na citometria de fluxo, excite o iodeto de propídio para excluir as células mortas e identificar as células vivas não fluorescentes.
Ilumine as células com um laser violeta; células vivas excitadas significam as células mieloides que expressam CD11b.
Em seguida, ilumine com um laser vermelho, excitando o fluoróforo vermelho quase distante dentro das células CD11b-positivas, indicando monócitos que expressam Ly6C e neutrófi
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