Um ensaio de citometria de fluxo para identificar subconjuntos de células imunes em células mononucleares do sangue periférico

Pegue as células mononucleares do sangue periférico ou PBMCs, uma população de células mistas que inclui linfócitos e monócitos.

Adicione um corante de viabilidade fluorescente para discriminar células mortas e um coquetel de anticorpos marcado com fluorescência para identificar diferentes tipos de células.

Os anticorpos conjugados com fluorocromo A ligam-se a marcadores de superfície - CD3 em células T, receptor de células T γδ ou TCR em células T γδ e CD56 em células natural killer ou NK.

Os anticorpos conjugados com fluorocromo B ligam-se a CD4 e CD8 em células T, CD19 em células B e CD14 em monócitos.

Usando citometria de fluxo, identifique os subconjuntos de células vivas.

Enquanto as células T CD8⁺ e CD4⁺ são CD3⁺, as células CD4⁺ situam-se entre as células CD3 uni-positivas e as células CD3-CD8 duplamente positivas.

As células T γδ expressam TCRs γδ e CD3 mais altos em comparação com as células CD4⁺ e CD8⁺.

As células B e as células NK são CD3^-, mas são identificadas por CD19 nas células B e CD56 nas células NK.

Os monócitos são identificados pela expressão de CD14.

Para preparar os PBMCs para coloração, transfira 100 microlitros de cada amostra para uma placa de fundo em V