Usando sondas de tensão baseadas em DNA para avaliar as forças receptoras aplicadas pelas células imunes

Comece com uma lamínula de vidro funcionalizada com nanopartículas de ouro ancoradas em polietilenoglicol.

Adicione sondas de tensão de gancho de cabelo de DNA contendo um grampo de cabelo de DNA hibridizado com dois oligonucleotídeos em braços opostos.

A fita ligante inclui um fluoróforo e biotina, enquanto a fita âncora contém um sufre e um grupo tiol. Nesta configuração, o suprimir suprime a fluorescência.

As sondas de DNA se ligam às nanopartículas de ouro, ancorando-se na lamínula de vidro.

Introduzir estreptavidina, interagindo com as moléculas de biotina das fitas ligantes.

Adicione ligantes biotinilados que se ligam a moléculas de estreptavidina pré-ligadas.

Sobreponha a lamínula com células T CD8-positivas; seus receptores interagem com ligantes imobilizados, formando um local de interação receptor-ligante.

Essa interação gera uma força que desdobra a estrutura do grampo de DNA, separando o fluoróforo do supressor e promovendo a emissão de fluorescência.

Introduza fitas de travamento não fluorescentes que interagem com segmentos desdobrados das sondas para preservar o sinal de fluorescência.

Quantifique a fluorescência para avaliar as forças receptoras aplicadas pelas célu