Um ensaio baseado em CFSE para monitorar a migração de células dendríticas da pele para linfonodos de drenagem em camundongos infectados
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
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Pegue um rato anestesiado. Injete a suspensão de Mycobacterium bovis BCG na pata traseira.
As células dendríticas da pele reconhecem e fagocitam as micobactérias.
Além disso, os componentes micobacterianos processados são apresentados em moléculas de MHC classe II.
Injete o corante CFSE permeável às células na mesma almofada do pé.
As esterases intracelulares clivam a CFSE em um produto fluorescente impermeável às células, corando as células.
Além disso, as células dendríticas ativadas migram através dos vasos linfáticos para o linfonodo poplíteo, ativando as células T.
Extirpar cirurgicamente o linfonodo poplíteo e homogeneizá-lo através de um filtro, obtendo uma suspensão unicelular.
Centrifugue e ressuspenda as células em um tampão.
Transfira as células para um tubo de citometria de fluxo. Centrifugue e trate as células com um coquetel de anticorpos.
Os anticorpos bloqueadores de Fc bloqueiam os receptores Fc, enquanto os anticorpos marcados com fluoróforo se ligam aos marcadores de superfície CD11c e moléculas MHC classe II nas células imunes.
Usando citometria de fluxo, identifique as células dendríticas da pele marcadas com CFSE com alta expressão de MHC-II e baixa expressão
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