Utilizando bicamadas lipídicas suportadas por grânulos para investigar a saída sináptica das células T

Pegue as bicamadas lipídicas suportadas por contas, ou BSLBs, esferas de sílica revestidas com bicamadas lipídicas conjugadas com complexos antigênicos peptídeo-MHC, moléculas de adesão e co-estimulatórias, atuando como células sintéticas apresentadoras de antígenos.

Incubar com células T.

Os TCRs se ligam a peptídeos antigênicos em BSLBs, que, juntamente com sinais co-estimulatórios, formam uma sinapse imune, ativando as células T.

Essa ligação desencadeia cascatas de sinalização intracelular, induzindo o rearranjo da actina e formando microclusters na sinapse contendo moléculas de adesão e sinalização.

As células T liberam vesículas trans-sinápticas enriquecidas em TCRs, moléculas co-estimulatórias e conteúdo de grânulos líticos na sinapse, ligando-se a BSLBs.

Resfrie gradualmente a co-cultura para separar BSLBs de células T.

Centrifugue e descarte o sobrenadante. Use um tampão contendo proteínas para bloquear os locais de ligação livres nas superfícies.

Centrifugue e trate BSLBs e células T com anticorpos conjugados com fluoróforo que se ligam a moléculas específicas de sinalização e co-estimulatórias.

Usando citometria de fluxo, analise os sinais de fluorescência de BSLBs e cél