Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 6:27 min. • July 8th, 2025
Faça uma cultura de macrófagos derivados da medula óssea. Remova o meio e adicione a bactéria Salmonella, expressando uma proteína citoplasmática fluorescente.
Centrifugue para facilitar o contato bactéria-macrófago e incuba.
A bactéria se liga aos receptores de macrófagos, facilitando a internalização dentro de um fagossomo.
O fagossomo se funde com vesículas derivadas do endossomo e, simultaneamente, as bactérias secretam efetores, remodelando o fagossomo em um vacúolo ou SCV contendo Salmonella.
Um subconjunto de SCVs se rompe, liberando bactérias internalizadas no citoplasma.
Adicione um antibiótico para eliminar bactérias não internalizadas. Aspire o meio contendo bactérias mortas.
Introduza um tampão contendo o detergente digitonina, que se liga ao colesterol.
A ligação da digitonina à membrana plasmática rica em colesterol resulta na formação de poros, enquanto a membrana SCV deficiente em colesterol permanece intacta - um fenômeno denominado permeabilização diferencial.
Adicione anticorpos marcados com fluorescência que entram nas células permeabilizadas para se ligar às bactérias citosólicas.
Use um detergente para lisar as células e os SCVs, liberando todas as bactérias i
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