Um ensaio de fixação viral para triagem de compostos antivirais
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:47 min. • July 8th, 2025
Comece com uma placa de vários poços contendo uma monocamada de células de hepatoma humano pré-resfriada.
Tratar os alvéolos de teste com uma mistura do vírus da hepatite C geneticamente modificado que transporta o gene da luciferase e um composto-alvo; tratar os alvéolos de controlo apenas com o vírus.
Nos poços de teste, as moléculas-alvo interagem com glicoproteínas virais e receptores de superfície celular, impedindo a ligação viral.
No entanto, em poços de controle, as glicoproteínas virais interagem com os receptores da superfície celular, permitindo sua ligação. Uma temperatura baixa inibe a entrada viral.
Remova o sobrenadante, introduza um meio e reincube na temperatura ideal, facilitando a entrada viral.
Ao entrar, o vírus libera o material genético, iniciando a síntese de proteínas virais e enzimas luciferase, que são secretadas no meio.
Transfira o sobrenadante contendo luciferase e introduza um substrato.
A interação enzima-substrato produz luz proporcional aos níveis de luciferase.
A menor intensidade de luz nos poços de teste, em comparação com os poços de controle, indica a propriedade antiviral do composto alvo.
Para o ensaio de fixação viral, coloque 1 x 104 célul
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