Um ensaio para avaliar o efeito dos compostos de teste na entrada e fusão viral em células hospedeiras

Pegue células cancerígenas do fígado e incube em baixa temperatura para prejudicar a endocitose.

Introduzir um vírus recombinante da hepatite C ou HCV, compreendendo um genoma de RNA projetado que codifica um repórter de luciferase secretado.

As lipoproteínas virais interagem com os proteoglicanos nas células hospedeiras, enquanto as glicoproteínas do envelope viral se ligam a receptores específicos do hospedeiro.

Em poços selecionados, adicione o composto de teste que se liga às glicoproteínas virais.

Após a incubação à temperatura fisiológica, os vírus ligados são endocitados.

Descarte os vírus não internalizados, adicione um meio de crescimento e incuba.

Nos poços não tratados, as glicoproteínas auxiliam na fusão envelope-endossomo viral, liberando o nucleocapsídeo, enquanto o mascaramento composto prejudica a fusão nos poços tratados.

Após a liberação, o RNA expressa proteínas virais, incluindo a luciferase, que é secretada extracelularmente.

Colha o sobrenadante contendo luciferase e adicione um substrato bioluminescente, que é oxidado pela luciferase para emitir luz.

Uma diminuição da luminescência nos poços tratados em comparação com os não tratados indica inibição da fusão