Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:04 min. • July 8th, 2025
Comece com um DNAzyme de clivagem de RNA, um DNA catalítico que, ao se ligar a um biomarcador bacteriano específico, é ativado.
O DNAzyme está ligado a um grânulo magnético revestido de estreptavidina via biotina em sua extremidade 5 '. Na extremidade 3', ele está ligado a uma urease ligada a oligonucleotídeos, formando um grânulo magnético funcional.
A um tubo contendo esferas magnéticas funcionais, adicione um lisado de E. coli.
Um biomarcador específico de E. coli do lisado ativa o DNAzyme, desencadeando a clivagem da ligação do RNA, causando o descolamento do conjugado DNAzyme-urease.
Use um suporte magnético para imobilizar as esferas e remover o conjugado DNAzyme-urease ligado a contas.
Transfira o sobrenadante contendo urease liberado para outro tubo.
Adicione um corante indicador de pH - vermelho de fenol e uma solução de ureia.
A urease hidrolisa a uréia em amônia e dióxido de carbono.
A amônia, uma base fraca, eleva o pH da solução, causando uma mudança de cor, que indica a presença do biomarcador E. coli.
Depois de preparar as células de E. coli de acordo com o protocolo de texto, pré-lave um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro adicionando e vortando 100 microlitros
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