Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:10 min. • July 8th, 2025
Pegue poços contendo hidrogéis de poliacrilamida de rigidez variável revestidos com colágeno, imitando uma matriz extracelular fisiológica, ou ECM.
Adicione células endoteliais microvasculares que formam aderências focais, ou FAs - complexos que medeiam a ligação célula-ECM - para sentir a rigidez do hidrogel.
Hidrogéis mais rígidos elevam a expressão de vimentina na superfície celular, um componente do citoesqueleto, em comparação com hidrogéis mais macios.
Adicione a bactéria Listeria monocytogenes, projetada para expressar uma proteína fluorescente sob o promotor da proteína indutora de montagem de actina, ou ActA.
Centrifugue para sincronizar o contato bacteriano com as células hospedeiras e incuba.
A bactéria se liga à vimentina. Mais vimentina nas células hospedeiras mais rígidas ligadas ao hidrogel leva a mais adesão bacteriana e endocitose.
Adicione um antibiótico, eliminando bactérias não internalizadas.
As bactérias internalizadas secretam toxinas, rompendo a membrana do endossomo. O escape citoplasmático ativa o promotor ActA para expressar a proteína fluorescente, marcando bactérias intracelulares.
Separar enzimaticamente as células. Usando citometria de fluxo, detecte
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos