Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:24 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa de vários poços com monocamadas de células endoteliais humanas aderentes em hidrogéis de poliacrilamida revestidos com colágeno de rigidez variável.
As células em hidrogéis mais rígidos sofrem reorganização significativa do citoesqueleto, aumentando a tensão intracelular, em comparação com hidrogéis mais macios.
Lave as células com meio e adicione Listeria monocytogenes modificada - expressando uma proteína fluorescente sob o promotor da proteína indutora de montagem de actina (ActA).
Centrífuga para facilitar o contato célula-bactéria. Incubar para mediar a endocitose bacteriana.
Lave com mídia. Trate com gentamicina para eliminar bactérias não internalizadas. Incubar.
As bactérias internalizadas liberam toxinas formadoras de poros, rompendo as membranas fagossômicas. As bactérias citosólicas regulam positivamente a expressão de ActA e proteínas fluorescentes, marcando bactérias intracelulares.
As proteínas ActA induzem a polimerização da actina, formando uma cauda de cometa de actina impulsionando as bactérias para frente, causando internalização por células vizinhas e promovendo a disseminação.
Após a incubação, use meios contendo corante para corar os núcleos da
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