Um ensaio de utilização de ATP para determinar a sobrevivência bacteriana sob tratamento com antibióticos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:56 min. • July 8th, 2025
Comece semeando uma cultura bacteriana em uma placa de ensaio. Em seguida, incube a placa.
As células bacterianas possuem adesinas e pili superficiais que lhes permitem aderir umas às outras, formando pequenos agregados.
Adicione concentrações variadas de antibióticos aos poços, deixando um sem tratamento para controle.
As moléculas de antibióticos interagem com bactérias sensíveis, afetando sua capacidade de crescer e se reproduzir, levando à sua morte.
As bactérias resistentes a antibióticos permanecem metabolicamente ativas, produzindo moléculas de ATP.
Use um sonicador para interromper as células bacterianas, liberando seu conteúdo intracelular, incluindo ATP.
Adicione o reagente luminoso de utilização de ATP contendo luciferina, enzima luciferase e outros cofatores.
A luciferase utiliza ATP e oxigênio para converter a luciferina em uma oxiluciferina excitada.
A oxiluciferina subsequentemente faz a transição para seu estado fundamental, emitindo luz luminescente.
Meça a absorbância usando um leitor de placas.
A diminuição da absorbância em concentrações mais altas de antibióticos sugere menor produção de ATP, indicando uma taxa de sobrevivência bacteriana reduzida.
Meça a densi
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