Determinando o papel das células semelhantes a neutrófilos na sensibilidade das células do linfoma a um medicamento de teste

Pegue uma placa de vários poços contendo monoculturas esferóides 3D de células de linfoma, glóbulos brancos cancerígenos e co-culturas de linfoma e células semelhantes a neutrófilos em uma matriz de membrana basal.

Adicione um medicamento de teste que se ligue à tubulina intracelular e interrompa a polimerização dos microtúbulos, resultando em apoptose celular.

Na co-cultura, o contato direto com células do linfoma ativa as células semelhantes a neutrófilos, induzindo a secreção de citocinas.

Essas citocinas interagem com os receptores das células do linfoma, desencadeando cascatas de sinalização a jusante e regulando positivamente a expressão de proteínas antiapoptóticas, promovendo a sobrevivência celular.

Descarte a mídia. Adicione um tampão de dissociação para interromper a adesão celular.

Raspe os esferóides e incube-os sob agitação. Transfira a suspensão para tubos e continue a agitação para formar suspensões unicelulares.

Introduza um coquetel de anticorpos conjugado com fluoróforo que rotula linfoma e células semelhantes a neutrófilos.

Adicione anexina V marcada com fluoróforo e iodeto de propídio para marcar células apoptóticas e mortas.

Usando citometria de fluxo, detecte