Um ensaio para avaliar a imunodominância nas respostas de linfócitos T citotóxicos

Comece com células-alvo marcadas com corante fluorescente apresentando um epítopo de peptídeo não reativo ou epítopos de peptídeos derivados de antígeno tumoral com imunogenicidade variável.

Essas células exibem intensidades de fluorescência variadas - baixa, intermediária e alta - correspondendo à apresentação de epítopos peptídicos não reativos, subdominantes e imunodominantes, respectivamente.

Administrar a suspensão celular por via intravenosa a um ratinho sensibilizado.

As células injetadas viajam para o baço contendo populações de células imunes, incluindo linfócitos T citotóxicos ou CTLs.

Dentro do baço, os CTLs interagem com os epítopos das células-alvo.

Os epítopos imunodominantes, sendo mais imunogênicos, desencadeiam uma resposta imune CTL robusta, liberando substâncias citotóxicas e resultando em lise celular fluorescente de alta intensidade.

Colete o baço do rato e interrompa-o mecanicamente. Adicione um tampão de lise para eliminar os glóbulos vermelhos e filtrar a suspensão.

Centrifugue e ressuspenda o pellet da célula.

Classifique as células usando um classificador de células ativado por fluorescência. A redução das células fluorescentes de alta intensidade, em comp