Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:50 min. • July 8th, 2025
Pegue uma placa multipoços contendo bactérias entéricas patogênicas em um meio de crescimento.
O meio nos poços selecionados contém sais biliares - ou moléculas anfipáticas com atividade semelhante a detergente - imitando condições adversas de crescimento.
Os sais biliares rompem a membrana bacteriana e causam danos ao DNA e às proteínas.
Como mecanismo de contra-ataque, as bactérias formam um biofilme - uma comunidade bacteriana estruturada envolta em uma matriz autoproduzida de substâncias poliméricas extracelulares, ou EPS, contendo polissacarídeos, proteínas, lipídios e ácidos nucléicos de origem microbiana.
A camada de EPS protege as bactérias da exposição aos sais biliares.
Após a incubação, aspire o meio para remover bactérias flutuantes.
Trate com um tampão de fixação para preservar a arquitetura do biofilme e lave para remover o excesso de tampão.
Adicione a Concanavalina A marcada com fluorescência - uma lectina que se liga aos polissacarídeos EPS, marcando o biofilme. Lave para remover o excesso de Concanavalina A.
Usando um leitor de placas, meça a fluorescência. Uma intensidade de fluorescência mais alta nos poços contendo sais biliares indica a formação de biofilme in
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