Um método de preparação de amostras para visualizar bactérias formadoras de biofilme em hifas fúngicas

Introduza uma colônia fúngica ligada ao celofane em uma suspensão bacteriana marcada com fluorescência. Retire o celofane e incuba.

As células bacterianas aderem à superfície do fungo por meio de moléculas e receptores de superfície. As bactérias aderidas secretam substâncias poliméricas extracelulares que consistem em polissacarídeos, proteínas e DNA, prendendo as células bacterianas e formando a base estrutural do biofilme.

Enxágue a seção em uma solução salina forte para remover bactérias frouxamente ligadas

Em um tampão fosfato, corte uma seção da colônia.

Transfira a seção para água estéril contendo aglutinina de gérmen de trigo ou WGA ligado a um corante fluorescente vermelho.

WGA, uma proteína vegetal, liga-se a resíduos de N-acetilglucosamina e ácido siálico, permitindo que o corante ligado fluoresça na parede celular do fungo.

Enxágue a seção em um tampão de fosfato.

Mergulhe parcialmente uma lâmina no buffer. Deixe a seção flutuar sobre ele. Levante suavemente para que a seção assente sem ruptura do biofilme.

Coloque um meio de montagem, seguido de uma lamínula para análise microscópica.

Depois de cultivar a bactéria durante a noite, centrifugue a cultura a 5.000 vezes g