Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:37 min. • July 8th, 2025
Trate culturas neuronais com concentrações crescentes de uma toxina de teste.
A toxina entra nas células e é liberada no citosol.
Dependendo de seu potencial, a toxina pode impedir a fusão vesicular, inibindo a liberação de neurotransmissores.
Substitua o meio por um tampão contendo compostos neurofarmacológicos específicos para bloquear os potenciais de ação neuronal.
Coloque a placa de cultura em um estágio de eletrofisiologia. Para iniciar a gravação, conecte um soma de neurônio com uma pipeta contendo um eletrodo de gravação.
Aplique pressão negativa constante para aspirar uma pequena porção da membrana, formando um gigaseal, um selo hermético que garante interferência mínima durante a gravação.
Mantenha uma voltagem de membrana constante para medir as correntes neuronais.
Aplique pulsos de pressão negativa para romper a membrana, estabelecendo contato direto entre o neurônio e a pipeta.
Registre as correntes produzidas no neurônio devido à captação de neurotransmissores, denominadas mEPSCs.
Uma diminuição na frequência de mEPSC com o aumento da exposição à toxina indica a inibição da liberação de neurotransmissores.
Diluir a neurotoxina botulínica sorotipo A até 100 vezes a co
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