Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:22 min. • July 8th, 2025
Comece com um tubo contendo vetores separados para os genes de anticorpos de cadeia pesada e de cadeia leve.
Adicione um reagente de transfecção para formar complexos com os vetores.
Transfira essa mistura para as células hospedeiras de mamíferos e incube para internalização.
Adicione um agente antiaglomerante para promover a distribuição uniforme das células transfectadas, melhorando a recuperação e o crescimento celular.
Adicione uma solução antibacteriana-antimicótica para evitar contaminação.
Dentro da célula hospedeira, os vetores se integram ao genoma do hospedeiro.
Após a transcrição do gene, os mRNAs individuais saem do núcleo e passam pela tradução para formar cadeias de anticorpos nascentes.
A dobragem e modificação adequadas das correntes nascentes produzem correntes pesadas e leves.
Essas cadeias se combinam para formar anticorpos totalmente funcionais, que são então liberados no meio extracelular.
Colha o meio e centrifugue. Filtre o sobrenadante.
Passe o filtrado por uma coluna de purificação que permita a ligação seletiva dos anticorpos.
Usando um tampão de eluição, eluir os anticorpos purificados.
Cultive células CHO em 200 mililitros de meio em frascos longos com d
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