Medindo a ativação de funções efetoras mediadas por Fc por anticorpos HA

Tome diluições seriadas de um anticorpo direcionado ao vírus Influenza hemaglutinina, ou HA, uma glicoproteína que consiste em uma cabeça globular e um caule.

Adicione as diluições em células de mamíferos transfectadas que expressam HA ligado à superfície. Os anticorpos se ligam às regiões do caule do HA, formando complexos imunes.

Introduzir células T modificadas expressando receptores Fc e codificando um repórter de luciferase sob o controle do fator de transcrição NFAT.

Durante a incubação, o anticorpo ligado ao HA se liga ao receptor Fc, enquanto a cabeça do HA se liga ao ácido siálico, desencadeando a ativação das células T e aumentando a concentração citosólica de cálcio.

Essa ativação inicia uma cascata de sinalização que resulta na desfosforilação do NFAT, desencadeando sua translocação nuclear.

O NFAT se liga aos seus elementos de resposta no genoma, impulsionando a expressão da luciferase.

Adicione um substrato bioluminescente permeável às células. A luciferase oxida o substrato, produzindo um sinal.

A luminescência diminuída com a diminuição da concentração de anticorpos confirma a ativação de células T mediadas por anticorpos específicos do caule HA.

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