Uma tecnologia de hibridoma para produção de anticorpos monoclonais contra uma metalopeptidase

Pegue um camundongo imunizado com uma metalopeptidase. Colha o baço e obtenha uma suspensão celular.

Filtre a suspensão através de uma tela e centrifugue, removendo os restos de tecido.

As células isoladas incluem células B específicas da metalopeptidase, produzindo anticorpos contra epítopos de metalopeptidases.

Adicione células de mieloma imortais sem a enzima HGPRT, impedindo a recuperação de nucleobases para a síntese de nucleotídeos. Eles sobrevivem por meio da síntese de nucleotídeos de novo.

Centrifugar para obter um pellet e rejeitar o sobrenadante.

Adicione PEG e incube, induzindo a fusão de células mieloma-B para formar hibridomas imortais positivos para HGPRT.

Adicione o meio HAT compreendendo hipoxantina, aminopterina e timidina. Transfira para poços contendo uma camada alimentadora de macrófagos peritoneais, promovendo o crescimento do hibridoma.

A aminopterina bloqueia a síntese de nucleotídeos de novo, causando a morte das células do mieloma não fundidas. As células B não fundidas morrem devido à sua curta vida útil.

Os hibridomas positivos para HGPRT salvam os precursores de nucleotídeos hipoxantina e timidina, proliferam e secretam anticorpos monoclonais específico