Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:38 min. • July 8th, 2025
Comece com um tubo contendo um agente de transfecção à base de lipídios catiônicos e adicione plasmídeos de expressão recombinantes.
O plasmídeo carrega um gene que codifica anticorpos recombinantes direcionados à metalopeptidase e proteína fluorescente verde ou GFP sob um promotor, enquanto o gene de resistência a antibióticos está sob outro promotor.
Os lipídios carregados positivamente interagem com um plasmídeo carregado negativamente, formando um complexo.
Transfira os complexos para uma placa de vários poços contendo células de mamíferos, permitindo que o plasmídeo entre no citoplasma.
O plasmídeo atinge o núcleo e é transcrito em mRNAs para proteínas de resistência a antibióticos e mRNAs bicistrônicos que codificam anticorpos recombinantes e GFPs.
Esses mRNAs levam à produção de anticorpos recombinantes, GFPs e proteínas de resistência a antibióticos.
Após a transfecção, substitua o meio por um meio enriquecido com soro.
Introduza um antibiótico, eliminando seletivamente as células não transfectadas enquanto as células transfectadas resistentes a antibióticos sobrevivem.
Utilizando a técnica de classificação de células ativadas por fluorescência, recolher as células fluoresc
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