Uma técnica para gerar anticorpos monoclonais a partir de células B específicas do antígeno

Pegue os vetores de expressão eucariótica, codificando uma cadeia pesada de anticorpos ou uma cadeia leve de anticorpos, clonados a partir de células B específicas do antígeno.

Introduzir polietilenomina, um polímero catiônico, que interage eletrostaticamente com os vetores carregados negativamente, formando poliplexos.

Incubar células de mamíferos com os poliplexos, que aderem às células e são internalizados via endocitose. Os endossomos resultantes se fundem com os lisossomos.

Os polímeros nos poliplexos causam inchaço osmótico da vesícula, levando à sua ruptura e liberação dos vetores.

Os vetores liberados entram no núcleo e são transcritos em mRNA de cadeia pesada e de cadeia leve, que sofrem tradução via ribossomos no retículo endoplasmático.

As cadeias peptídicas resultantes se reúnem em anticorpos, que são transportados para o Golgi e empacotados em vesículas secretoras.

Após a fusão das vesículas secretoras e da membrana celular, os anticorpos são liberados extracelularmente.

Colha o sobrenadante contendo anticorpos para ensaios a jusante.

Semear 15.000 células renais embrionárias humanas em 200 microlitros de Dulbecco's Modified Eagle Medium suplementado com 10% de soro fe