Entrega de anticorpos aprimorada por convecção em um cérebro de camundongo

Prenda um camundongo anestesiado que tenha uma incisão na linha média cranial em uma estrutura estereotáxica.

Detecte o bregma, um ponto de referência no crânio, e determine o local da injeção.

Crie um orifício de rebarba no local, evitando danos à dura-máter que cobre o cérebro.

Pegue um cateter carregado com anticorpos, montado em um robô estereotáxico e conectado a uma bomba de infusão.

O cateter compreende um capilar de sílica fundida que se projeta de uma agulha de metal, criando um diâmetro externo escalonado no ponto de fusão.

Insira o cateter no parênquima cerebral. Ligue a bomba de infusão para criar um gradiente de pressão na abertura do cateter e administre os anticorpos a uma taxa controlada, uma técnica conhecida como entrega aprimorada por convecção.

O diâmetro escalonado comprime o tecido, criando uma vedação.

A vedação evita o refluxo de fluidos e permite a distribuição de grandes volumes de anticorpos, reduzindo o risco de danos aos tecidos.

Para injeção de anticorpos no estriado murino, confirme a falta de resposta ao beliscão da pele em um camundongo anestesiado e raspe a cabeça com um aparador de cabelo. Desinfete a pele com cotonetes embebidos em solução de iodo.

Use um bisturi para fazer uma incisão na pele de 10 milímetros ao longo da linha média craniana, terminando no nível dos olhos. Fixe o mouse na estrutura estereotáxica usando o grampo do nariz e as barras auriculares, tomando cuidado para que a superfície do crânio esteja horizontal e bem presa.

Coloque a seringa no robô estereotáxico e sincronize a broca com a ponta do cateter em um ponto de referência. Use uma pinça para retrair a pele e localize o bregma na superfície do crânio. Faça referência ao bregma no software usando a ponta da broca e mova a broca para uma frente de 1 milímetro e lateral de 2 milímetros da posição do bregma.

Faça um furo de rebarba, tomando cuidado para não danificar a dura-máter, e mova a seringa sobre o orifício de rebarba. Dispense 0,5 a 1 microlitro da seringa para garantir que não fiquem bolhas de ar no cateter. Inicie a entrega aprimorada por convecção conforme demonstrado, observando a superfície do crânio em busca de vestígios de refluxo de fluido do local de injeção.

No final da entrega e remoção do cateter, inicie a bomba injetora a 0,2 microlitros por minuto para verificar se há evidências de entupimento do cateter durante a injeção. Se não ocorrer entupimento, uma gota de mistura de injeção deve ser imediatamente observada saindo da ponta do cateter.