Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:48 min. • July 8th, 2025
Comece com os discos de papel de filtro funcionalizados com amina e mergulhe-os em glutaraldeído, um reagente de reticulação.
O glutaraldeído reage com os grupos amina por meio de uma reação amina-aldeído.
Coloque os discos em um tubo. Adicione água, agite e aspire para remover o glutaraldeído residual.
Após a secagem, introduza os anticorpos de captura específicos para fragmentos de imunoglobulina-G-Fc. Os grupos amina nesses anticorpos interagem com grupos aldeídos em discos de papel, facilitando sua imobilização covalente.
Lave para remover anticorpos não ligados e introduza um tampão de bloqueio para evitar ligações não específicas.
Em seguida, adicione uma amostra de teste contendo moléculas de imunoglobulina G no disco de papel. As moléculas de imunoglobulina G interagem com os anticorpos de captura.
Sobreposição com anticorpos de detecção específicos de fragmentos de IgG-Fc conjugados com peroxidase de rábano que interagem com a imunoglobulina G pré-ligada.
Lave para remover os anticorpos não ligados e adicione uma mistura de substrato cromogênico e peróxido de hidrogênio.
Na presença de peróxido de hidrogênio, a peroxidase de rábano catalisa a oxidação do substrato cromogên
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