Um ensaio in vitro para avaliar o efeito de anticorpos no biofilme de Candida tropicalis

Pegue uma microplaca contendo o fungo Candida tropicalis.

As células secretam Sap2, uma enzima proteolítica que cliva uma glicoproteína transmembrana chamada Msb2, removendo seu domínio inibitório.

Isso induz o fungo a aderir ao fundo e se transformar em uma microcolônia de leveduras e formas filamentosas. As células secretam componentes solúveis e biopolímeros, iniciando a formação de biofilme.

Adicione uma amostra de soro contendo anticorpos específicos para Sap2 a poços selecionados e incube no escuro.

Os anticorpos se ligam ao Sap2 e neutralizam sua atividade, impedindo a viabilidade celular e a maturação do biofilme.

Em poços não tratados, o biofilme amadurece em uma densa rede de células e matriz extracelular.

Aspire o líquido, lave o biofilme e seque a placa ao ar. Adicione um substrato cromogênico e incube no escuro.

As células viáveis, utilizando oxidorredutases ligadas à membrana, reduzem o substrato a um produto colorido.

Transferir o sobrenadante colorido e ler a absorvância.

Uma menor absorbância nos poços tratados com soro indica inibição do biofilme mediada por anticorpos.

Preparar diluições seriadas de amostras de soro inactivadas pelo calor em meio estéril RPMI1640