Um método baseado em imunofluorescência para visualização de células de tufo em criosseções de jejuno

Comece com uma placa de cultura contendo crioseções de jejuno de camundongo fixadas em formalina e cheias de gelatina, apresentando células de tufo com microvilosidades apicais e soma em forma de carretel.

Lave com um tampão contendo detergente para permeabilizar as membranas celulares.

Adicionar uma solução alcalina de recuperação de antigénio. Incube para quebrar as ligações cruzadas de proteínas induzidas pela fixação, revelando as proteínas para coloração.

Aplique uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.

Sobreposição com anticorpos primários direcionados a uma proteína de ligação à actina, especificamente fosforilada em células de tufo.

Remova os anticorpos não ligados. Introduza uma mistura de anticorpos secundários conjugados com fluoróforo, corante de ligação ao DNA e conjugado de corante fluorescente de faloidina.

Os anticorpos secundários se ligam aos anticorpos primários, o conjugado de corante fluorescente de faloidina marca a actina e o corante de ligação ao DNA marca os núcleos das células.

Remova os componentes não ligados e adicione um tampão sem detergente.

Transfira a seção para uma lâmina de vidro revestida com adesivo, montando