Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 2:29 min. • July 8th, 2025
Comece com um frasco contendo células de mamíferos transfectadas de forma estável em um meio sem soro suplementado com um surfactante não iônico para evitar a agregação celular.
Essas células carregam um genoma modificado contendo genes integrados de cadeia pesada e leve para a produção de anticorpos terapêuticos.
Introduzir a triptona, uma fonte rica em nutrientes de peptídeos e aminoácidos essenciais para o metabolismo celular.
A célula utiliza esses aminoácidos e peptídeos e se multiplica, resultando em um crescimento excessivo que suporta um maior rendimento de anticorpos.
A expressão de genes nas células impulsiona a produção de polipeptídeos de cadeia pesada e leve.
No retículo endoplasmático, essas cadeias se dobram e dimerizam por meio de ligações dissulfeto entre cadeias, formando anticorpos terapêuticos.
No aparelho de Golgi, os anticorpos sofrem modificações pós-traducionais. Eles são então embalados em vesículas e liberados no meio.
Incube as células por mais tempo para aumentar a produção de anticorpos.
À medida que a viabilidade celular começa a diminuir, colha o sobrenadante.
Filtre o sobrenadante contendo anticorpos terapêuticos e armazene-o a uma temperatura mais baixa para uso posterior.
Células de sementes a 2 x 105 células por mililitro em 100 mililitros de meio isento de soro em dois frascos. Incube as células a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono a 120 rotações por minuto por 24 horas. À cultura suplementada com nutrientes, adicionar triptona a uma concentração final de 0,5%. Em seguida, use meio sem soro para equalizar o volume da cultura não suplementada. Incube as células por mais sete dias.
A partir do oitavo dia de cultivo, conte as células diariamente usando um hemocitômetro para monitorar a viabilidade celular. Quando a viabilidade celular atingir menos de 80%, colher a cultura por centrifugação a 3.000 vezes g por 15 minutos. Em seguida, filtre o sobrenadante através de um filtro de 0,22 micrômetro. Armazene os sobrenadantes a 4 graus Celsius a curto prazo ou congele a graus Celsius a longo prazo.