Uma técnica de coloração por imunofluorescência para detectar a neurogênese do hipocampo adulto

Pegue uma seção do cérebro murino consistindo do giro dentado do hipocampo, um local para neurogênese composto por progenitores neuronais em estágios distintos de diferenciação.

Transfira a seção para uma solução de bloqueio de permeabilização. As moléculas de detergente na solução permeiam as células, enquanto as proteínas bloqueiam os locais de ligação não específicos.

Adicione um coquetel de anticorpos primários direcionados a marcadores específicos de neurogênese, uma proteína associada a microtúbulos e uma proteína de filamento intermediário.

Remova os anticorpos não ligados. Introduza diferentes anticorpos secundários marcados com fluoróforo ligando-se aos anticorpos primários.

Adicione proteínas séricas do mesmo hospedeiro como um dos anticorpos primários, saturando os paratopos dos anticorpos secundários.

Introduzir fragmentos monovalentes de Fab que saturam os epítopos das proteínas séricas, impedindo a ligação não específica.

Adicione um segundo anticorpo primário criado no mesmo hospedeiro, ligando-se a outra proteína de filamento intermediário.

Introduzir anticorpos secundários marcados com fluoróforo direcionados ao segundo anticorpo primário.

Usando microscopia de flu