Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:04 min. • July 8th, 2025
Comece lavando uma seção cardíaca fixa em um tampão de cacodilato de sódio que estabiliza a estrutura do tecido. Mergulhe a seção em tetraóxido de ósmio para corar os lipídios da membrana.
Trate com acetato de sódio para manter um pH ideal para a coloração.
Adicione acetato de uranila para corar biomoléculas, proporcionando melhor contraste durante a microscopia.
Desidratar o tecido em concentrações crescentes de etanol seguido de acetona.
Incorpore o tecido em uma resina, obtenha cortes ultrafinos e transfira-os para uma grade de microscopia.
Introduzir meta-periodato de sódio para remover o tetraóxido de ósmio, desmascarando a proteína celular.
O composto também oxida a glicoproteína, criando grupos aldeídos reativos, que são neutralizados pelo tratamento com glicina.
Introduzir um tampão de bloqueio, impedindo a ligação de anticorpos não específicos.
Adicione anticorpos primários específicos para a proteína alvo seguidos por anticorpos secundários biotinilados.
Adicione pontos quânticos conjugados com estreptavidina que se ligam à biotina.
Sob um microscópio eletrônico, as regiões marcadas com pontos quânticos exibem maior contraste, auxiliando na localização subcelular precisa
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