Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:43 min. • July 8th, 2025
Pegue um rim de camundongo fixo. Os lipídios no tecido causam dispersão de luz e os pigmentos causam absorção de luz, tornando as células opacas.
Trate o tecido com CUBIC-L para delipidação e descoloração. O álcool amino no CUBIC-L remove lipídios e pigmentos, minimizando a dispersão da luz e aumentando a transparência.
As moléculas de detergente no CUBIC-L também permeabilizam as células.
Introduza um coquetel de anticorpos primários que se liga à tirosina hidroxilase citoplasmática nos neurônios dos nervos simpáticos e à actina do músculo liso alfa nas células musculares lisas dos vasos.
Adicione anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Realize a pós-fixação do tecido para preservar o tratamento com anticorpos.
Mergulhe o tecido em CUBIC-R+ que substitui a água e corresponde ao índice de refração das proteínas, minimizando ainda mais a dispersão da luz e aumentando a transparência.
Sob um microscópio de fluorescência de folha de luz, folhas de luz iluminam o tecido, excitando os fluoróforos.
Capture a luz emitida pelo fluoróforo e reconstrua uma imagem tridimensional, exibindo a distribuição nervosa simpática ao redor das artérias do r
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