Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:09 min. • July 8th, 2025
Faça a criossecção de uma biópsia de pele de um paciente com doença de Parkinson envolta em um meio de inclusão.
O tecido compreende uma epiderme mais externa, uma derme subjacente e gordura subcutânea inervada por nervos.
Lave a seção para remover o meio de incorporação. Transfira-o para uma solução de bloqueio de permeabilização, permeabilizando as células e bloqueando locais de ligação não específicos.
Mergulhe a seção em um coquetel de anticorpos primários para obter uma marcação uniforme de anticorpos, denominada coloração flutuante.
Os anticorpos entram nos neurônios e se ligam a agregados de alfa-sinucleína distribuídos ao longo dos axônios - uma forma agregada característica de doenças neurodegenerativas - e hidrolases carboxila-terminal.
Introduza anticorpos secundários conjugados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários.
Trate com um corante de ligação de DNA fluorescente que mancha o núcleo.
Coloque o tecido em uma lâmina, aplique um meio de montagem e sele com uma lamínula.
Sob um microscópio confocal, a fluorescência de ambos os anticorpos revela a presença de agregados de alfa-sinucleína ao longo dos axônios dos neurônios dérmicos.
Para começar, encha algu
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