Detecção de anticorpos antiglicanos circulantes com uma matriz de glicanos impressa

Comece com um glicochip funcionalizado com sub-matrizes de glicanos impressas organizadas em blocos de matrizes.

Cada ponto no sub-array representa um glicano distinto - um polímero à base de carboidratos com variações na composição de monossacarídeos, comprimento da cadeia e padrão de ramificação.

Trate o glicochip com um tampão de bloqueio para bloquear locais de interação não específicos.

Transfira o glicochip e introduza soro de camundongo diluído em um tampão suplementado com surfactante para minimizar a agregação de anticorpos. Incubar sob agitação.

A agitação promove a distribuição uniforme do soro, facilitando a ligação seletiva de anticorpos antiglicanos a glicanos específicos com base em características moleculares distintas.

Lave com concentrações decrescentes de um tampão contendo surfactante para perturbar a ligação não específica e enxágue.

Cubra o glicochip com anticorpos secundários conjugados com biotina de camundongo, interagindo com anticorpos antiglicanos pré-ligados e lave.

Introduza estreptavidina marcada com fluoróforo, ligando-se a anticorpos secundários biotinilados. Lave e remova o excesso de solução.

Examine o glicochip e observe se há manchas de fluoresc