Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 4:57 min. • July 8th, 2025
Coloque uma placa de cultura com embriões de peixe-zebra descorionados embebidos em agarose sobre um microscópio stage.
Pegue uma solução de corante contendo uma baixa concentração de conjugados de anticorpos, carregando um anticorpo marcado com fluorescência vermelha e um anticorpo anti-DeltaD.
Injete a solução de corante no ventrículo do rombencéfalo do embrião, visando os progenitores da glia radial em divisão ativa ou RGPs.
Solte o embrião embutido e recupere-o em um meio rico em nutrientes.
Durante a recuperação, os conjugados fluorescentes interagem com algumas moléculas Notch ligantes DeltaD no RGP, iniciando a internalização e a formação de endossomos.
A baixa concentração conjugada permite que os ligantes DeltaD não ligados interajam com o receptor Notch, ativando a via de sinalização Notch em RGPs.
Após a recuperação, transfira um embrião anestesiado com agarose para um prato de vidro com o lado dorsal voltado para baixo para obter imagens.
Realize imagens de fluorescência de lapso de tempo para capturar a divisão celular, que mostra uma partição assimétrica de endossomos fluorescentes contendo DeltaD em duas células-filhas, confirmando a ativação da sinalização Notch / D
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