Usando um sanduíche ELISA para determinar o conteúdo de glicoproteína imunogênica em uma vacina

Comece com uma placa de ensaio passivada revestida com anticorpos monoclonais imunogênicos específicos para glicoproteínas antirrábicas e um agente bloqueador para evitar interações inespecíficas.

Introduzir vacinas antirrábicas diluídas em série e testar vacinas antirrábicas com conteúdo decrescente de glicoproteínas. Sele a placa para evitar contaminação.

Durante a incubação, as glicoproteínas imunogênicas interagem com anticorpos monoclonais revestidos por meio de um local antigênico específico.

Após a incubação, remova o filme, aspire o sobrenadante e lave a placa.

Sobreposição com anticorpos monoclonais específicos de glicoproteína conjugada com enzima que se ligam a um local antigênico diferente na glicoproteína, formando um imunocomplexo.

Adicionar uma solução contendo um substrato e um cromógeno. Quando o substrato interage com a enzima, causa a oxidação do cromógeno, alterando a cor da solução.

Adicione uma solução de parada para inativar as enzimas.

Meça a absorbância e gere uma curva de referência usando os valores de referência da vacina.

Identificar a região onde existe uma relação linear entre a absorvância e o teor de glicoproteínas das diluições da vacina de referên