Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 3:31 min. • July 8th, 2025
Comece com um cartucho microfluídico equipado com tanques de armazenamento e bombas unidirecionais que fornecem reagentes através de canais para uma zona de reação.
A zona de reação contém vários pontos imobilizados com alérgenos distintos.
Carregue o tampão de lavagem, o tampão de bloqueio, os anticorpos secundários conjugados com peroxidase e um substrato de peroxidase quimioluminescente nos tanques designados.
Adicione uma amostra de soro contendo imunoglobulina E ou IgE específica para alérgenos.
Inicie a análise dentro de um analisador de quimioluminescência.
Dentro da zona de reação, o tampão de bloqueio flui e bloqueia locais de interação não específicos.
A introdução do soro permite que as IgEs interajam com os alérgenos imobilizados.
A lavagem elimina IgEs não ligadas.
Em seguida, os anticorpos secundários conjugados com peroxidase fluem e interagem com as IgEs imobilizadas.
A lavagem subsequente remove os anticorpos não ligados.
O analisador então introduz o substrato quimioluminescente e o peróxido de hidrogênio.
A peroxidase oxida o substrato, emitindo luminescência .
A intensidade da luminescência em cada ponto fornece uma indicação quantificável de IgEs específicas de alérgenos distintas no soro.
Para testar amostras de soro para anticorpos de imunoglobulina E sérica para alérgenos inteiros, selecione aleatoriamente três amostras com pelo menos 900 microlitros de soro, pegue o chip do kit e numere-o. Em seguida, ligue o computador e a alimentação do analisador. Inicie o programa LabIT no computador.
Se a janela de aviso de quadro escuro aparecer, clique em OK para executar um teste de vazamento. Em seguida, clique no logotipo central para entrar na interface de operação. Verifique a temperatura de reação e o dispositivo de carga acoplada ou temperatura CCD. A temperatura de reação deve subir para 37 mais ou menos 1 grau Celsius em cerca de 10 minutos, e a temperatura do CCD deve cair para menos 15 mais ou menos 1 grau Celsius.
Quando a temperatura do CCD cair para menos 15 graus Celsius para mais ou para menos, confirme se não há outros itens dentro do instrumento e feche a porta. Em seguida, clique em Ferramentas, Teste do sistema, Teste de vazamento. Quando o teste for concluído, a janela do relatório será exibida.
Em seguida, carregue 620 microlitros de tampão de lavagem, 120 microlitros de tampão de bloqueio, 60 microlitros de conjugados A e B, 60 microlitros de substratos A e B e 100 microlitros de cada amostra de soro nos tanques de reagentes correspondentes no cartucho microfluídico. Depois de clicar no ID do cartucho, use o leitor de código de barras para digitalizar o número de série do cartucho e insira o ID da amostra. Em seguida, coloque o cartucho no analisador, feche a porta, clique no analisador e execute para iniciar a análise.