JoVE Encyclopedia of Experiments
Imunologia
0 vistas • 3:31 min • July 8th, 2025
Comece com um chip de microarray de anticorpos impresso com anticorpos específicos.
Cada ponto contém um anticorpo único contra uma cepa específica de cianobactéria.
Trate o chip com um buffer de bloqueio para minimizar interações não específicas.
Monte o chip em um de hibridização com vários poços.
Introduza uma amostra ambiental nos poços e incuba-a em condições otimizadas.
A amostra contém várias bactérias, incluindo diferentes cepas de cianobactérias, que interagem com anticorpos específicos no chip impresso. Lave o chip para remover as bactérias não ligadas.
Adicione uma mistura de anticorpos contendo anticorpos anti-cianobactérias marcados com fluoróforo interagindo com antígenos específicos nas respectivas células cianobacterianas. Remova os anticorpos não ligados.
Desmonte o, lave e seque o chip e digitalize-o.
A fluorescência em pontos específicos significa a presença de cepas cianobacterianas específicas na amostra.
Configure a lâmina em um de hibridização de microarray de 3 por 8 poços seguindo as instruções do provedor. Como alternativa, depois de modificar o padrão de impressão de anticorpos, configure um feito sob medida, como o mostrado aqui, ou simplesmente use slides de capa para a configuração.
Após a montagem da lâmina e do, pipete até 50 microlitros de cada extrato de amostra ou diluição em tampão de incubação de extração em cada poço do. Como alternativa, coloque amostras em outros dispositivos de incubação ou simplesmente use lâminas de cobertura.
Como um controle em branco, pipete 50 microlitros de tampão TBST-RR em pelo menos dois poços separados do. Incubar as amostras à temperatura ambiente durante 1 hora e misturar pipetando de 15 em 15 minutos, ou incubar a 4 graus Celsius durante 12 horas.
Para lavar os microarrays, coloque o no chão e bata cuidadosamente no papel absorvente limpo. Em seguida, lave os poços adicionando 150 microlitros de tampão de incubação de extração a cada um e remova o tampão batendo no papel absorvente como antes. Repita a lavagem mais três vezes.
Para cada poço, adicione 50 microlitros da mistura de anticorpos fluorescentes que contém os 17 anticorpos anti-cianobactérias. Incubar as amostras à temperatura ambiente durante 1 hora ou a 4 graus Celsius durante 12 horas.
Para lavar os microarrays, coloque cuidadosamente o no chão e bata suavemente no papel absorvente limpo. Em seguida, adicione 150 microlitros de tampão de incubação de extração antes de removê-lo batendo em uma toalha de papel. Repita a lavagem três vezes. Em seguida, desmonte o e mergulhe a lâmina em solução 0.1x PBS para um enxágue rápido. Centrifugue rapidamente como antes para secar a lâmina.
Usando um scanner de fluorescência, escaneie a lâmina quanto à fluorescência no pico máximo de emissão para corante fluorescente vermelho distante. Tire várias imagens dos microarrays em diferentes parâmetros de varredura, alterando o valor de ganho.
Este estudo descreve um método para detectar cepas específicas de cianobactérias utilizando um chip de microarranjo de anticorpos. O processo envolve o tratamento de amostras ambientais com anticorpos para identificar e quantificar diversas interações de cianobactérias.
Chips de microarranjo de anticorpos permitem a detecção multiplex de cepas de cianobactérias em amostras ambientais complexas, apoiando a caracterização biológica de alto rendimento. Essa capacidade aprimora fluxos de trabalho de descoberta precoce ao fornecer dados quantitativos e específicos de cepa, essenciais para a validação de alvos e redução de riscos mecanicistas. A abordagem é relevante para equipes de biofármacos que buscam ferramentas robustas e escaláveis para perfilagem microbiana e desenvolvimento de ensaios.
Essa técnica de microarranjo de anticorpos insere-se na continuidade entre descoberta e pré-clínica, permitindo o perfilamento microbiano inicial e apoiando decisões de identificação de compostos líderes.
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Última atualização: 22 agosto 2026