Imunomarcação de células encapsuladas em um sistema de hidrogel 3D

Pegue uma placa de vários poços contendo células de mamíferos encapsuladas em um sistema de hidrogel imitando o ambiente natural da matriz extracelular.

Remova o meio de cultura. Trate com um tampão de fixação para reticular as proteínas, preservando a integridade celular.

Adicione uma solução contendo detergente para permeabilizar a membrana celular.

Introduzir uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos nas etapas subsequentes.

Adicione um coquetel de anticorpos primários que entra nas células e se liga especificamente aos filamentos intermediários citoplasmáticos e ao fator de transcrição alvo.

Remova os anticorpos não ligados. Introduza anticorpos secundários marcados com fluorescência e uma coloração nuclear para marcar o DNA com fluorescência.

Remova as moléculas não ligadas.

Monte a cultura de hidrogel em uma lâmina usando um meio de montagem.

Use um microscópio confocal para observar as células imunomarcadas.

Primeiro, aspire o meio de cada poço. Em seguida, lave os poços com 1 mililitro de DPBS quente. Após a conclusão da lavagem, adicione 750 microlitros de solução de fixação a cada poço. Em seguida, incube a placa de 24 poços a 37 graus Ce